内毒素清除树脂4FF

内毒素清除树脂4FF

英文名Endotoxin Out Sepharose 4FF

产品简介

内毒素清除树脂4FF是以4%高交联琼脂糖为基质，能特异性结合内毒素的亲和层析介质，可以一步纯化去除料液中的内毒

素。该树脂具有良好的物理和化学稳定性，能耐受不同温度、pH以及多种化学试剂。具有结合能力高、应用安全和易于放大

等特点，具体表现在该介质对目标物质内毒素具有良好的选择特异性和较高的吸附能力，并且无毒、无热源反应、无过敏反

应、不干扰机体免疫机制，因此具有良好的生物相容性和稳定性。

特征参数

基球                                         4% 高交联琼脂糖

动态吸附载量                            >106 EU/ml

pH 稳定性                               4 - 12（工作）；3 - 14（CIP）

平均粒径                                   90 μm

最大流速a                                600 cm/h

耐压                                         0.3 MPa

化学稳定性                              常用水相缓冲液

储存                                        20%乙醇

装柱

材料

• 层析柱  

• 内毒素去除树脂

• 装柱缓冲液：无内毒素用水或平衡缓冲液

注意：纯化使用的所有材料（例如容器、缓冲液和移液器吸头）必须不含内毒素，并且使用不含内毒素的水配制缓冲液及

其他溶液。

推荐装柱步骤

1.

根据计划装填的层析柱的柱体积计算需要的填料量（介质悬液浓度约为50~55%）。

需要的沉降介质体积=柱体积×压缩比

2.   将介质悬液充分摇匀后量取上述方法计算所得的体积，转移到容器中后，加入约3倍填料体积的无内毒素用水，填料沉

降后，去上清（也可倒入漏斗，抽去液体），重复3次，每次加纯水时需用玻璃棒或者搅胶棒搅拌，以便更好地清洗掉保存

液。

3.   装柱胶悬液准备：将清洗好的介质转移到烧杯或其它适当的容器中，加入装柱缓冲液至胶悬液浓度为50~75%，搅拌均

匀。

4.   取清洗干净的层析柱，用无内毒素用水，通过层析柱下端口排净下筛网内气泡，在柱子底部保留约1~2 cm高的液体，

关闭或拧紧下堵头，调整柱子使其垂直于地面。

5.   将搅匀后的胶悬液一次性缓慢倒入层析柱内（如有需要可使用装柱器），注意不要带入气泡。

6.   对于实验室用层析柱：用装柱缓冲液将装柱器加满，将装柱器与层析系统连接，开启流速，排空软管中气泡，关闭流

速，再拧紧装柱器上盖。待填料完全自然沉降或以30~60 cm/h流速冲至胶面稳定后，去掉装柱器，装上上柱头，将柱头下

降至胶面上约1 cm的位置，开启流速或者恒压压柱至胶面清晰稳定，标记胶面稳定时的柱高。稍微放松柱头密封圈，下压

柱头至标记位置下面约0.5 cm，旋紧柱头密封圈，装柱完成；

对于工业用层析柱：倒入后用搅胶棒再次搅匀，让介质自然沉降，直至悬液上有大约1~2 cm澄清液。安装上柱头，将

上柱头与层析系统连接。调节上柱头使其下降到与澄清液接触，待密封圈全部浸入澄清液后拧紧密封圈。确保层析柱顶部阀

门打开情况下，慢慢下移上柱头至所有气泡排净。待填料完全自然沉降或以30~60 cm/h流速冲至胶面稳定后，将柱头下降

至胶面上约1 cm的位置，开启流速或恒压压柱至胶面清晰稳定，标记胶面稳定时的柱高，稍微放松柱头密封圈，下压柱头

至标记位置下面约0.5 cm，旋紧柱头密封圈，或者按照填料压缩比下压上柱头至正确位置，装柱完成。

纯化方案

推荐缓冲液

• 平衡缓冲液：20 mM PB，0.3~0.5 M NaCl，pH 6~8

• 洗脱缓冲液：20 mM PB，2 M NaCl，pH 6~8

• 再生缓冲液：0.2 M NaOH

注意：纯化使用的所有材料（例如容器、缓冲液和移液器吸头）必须不含内毒素，并且使用不含内毒素的水配制缓冲液及

其他溶液。

样品预处理

为了保证层析介质使用寿命，样品在进入到层析柱前应使用0.22 或0.45 μm滤膜过滤，并确保样品的 pH值和离子强度与平

衡缓冲液相同。

纯化步骤

1. 第一次使用前需要进行预处理，用再生缓冲液冲洗5个柱体积，处理时间为1~2 h；

2. 用 5 个柱体积无内毒素的超纯水清洗层析柱；

3. 用至少5个柱体积无内毒素的平衡缓冲液平衡层析柱；

4. 将预处理后的样品进行上样，保留时间不低于6 min；上样量根据样品中内毒素含量和层析介质的量进行选择。收集流

穿；

5. 用平衡缓冲液冲洗层析柱至基线平稳；

6. 每次使用后都需再生层析柱，依次用2~3个柱体积的洗脱缓冲液和2~3个柱体积的0.2 M NaOH以100 cm/h流速冲

洗。

在位清洗（CIP）

在位清洗(CIP)可去除再生后仍留在层析柱中的杂质，如脂质、内毒素、核酸和沉淀或变性蛋白质。定期CIP可有效保护介

质，可参考以下方法对介质进行清洗：

• 常规清洗：用0.1~0.5 M NaOH以100 cm/h流速冲洗2~3个柱体积，并立即用至少5个柱体积平衡缓冲液重新平衡至中性。

• 去除强结合物质：用6 M盐酸胍或8 M尿素100 cm/h流速冲洗2~3个柱体积，并立即用至少5个柱体积平衡缓冲液重

新平衡至中性。

消毒

消毒可以最大限度地减少层析填料的微生物污染。建议使用0.2 M NaOH冲洗5个柱体积，并静置0.5~2 h，最后用无菌平

衡缓冲液在pH 7~8条件下重新平衡层析柱。