免DNA提取PCR试剂盒（需裂解）
CAT#:BFJ100314
产品介绍：本产品是可以直接用新鲜的动物、植物、细菌样品的裂解液进行PCR扩增的试剂盒。免DNA提取PCR，即在传统PCR技术的基础上，免去DNA提取
步骤。它有下列特点：
1. 操作简单，免去DNA提取、蛋白去除、RNA去除等步骤，5分钟即得用于PCR的模板。
2. 兼容性广，可以用于几乎所有的分子生物学样品，包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡、石蜡组织切片等。
3. 提供离心管专用研磨杵，便于处理棘手样品。
4. 环保健康，不使用任何有毒有害的试剂。
5. 尤其适用于大规模育种筛选和临床筛选。
6. 本试剂盒可以处理400份不同的样品，足够400次PCR实验。
7. 本产品只能用于科研。
产品组成：
成份 | 规格 | 保存 |
免 DNA 提取 PCR 溶液 A | 48 mL | 常温 |
免 DNA 提取 PCR 溶液 B | 48 mL | 常温 |
离心管专用研磨杵 | 200 只×2 | 常温 |
2×PCR MasterMix(电泳法) | 1 mL×6 | -20℃ |
自备试剂 自备PCR引物，阳性DNA样品，超纯水
使用方法：
1. 首次使用本制品时需要详细检查免DNA提取PCR溶液A和免DNA提取PCR溶液B是否有结晶析出。如果有需要37℃溶解后摇晃均匀待用。未用完部分可以放常温保存。
2. 根据材料不同参考下表取少量样品到1.5 mL塑料离心管中。
样品种类 | 取样量 |
动物组织 | 1~5 mg |
鼠尾 | 2 mm 长 |
血液样品 | 不超过 20 μL |
植物叶片 | 1~5 mg |
植物种子(去皮) | 1~5 mg |
酵母培养物 | 0.2~0.5 mL 培养物沉淀 |
细菌培养物 | 0.2~0.5 mL 培养物沉淀 |
3. 注意：未列出的样品，用户需要自己摸索最佳用量。对富含多醌多酚的植物材料（如棉花），组织使用量最好不要超过0.5 mg。
4. 加入100 μL免DNA提取PCR溶液A，确保免DNA提取PCR溶液A完全将样品淹埋。
5. 用离心管专用研磨杵小心将样品在离心管内捣碎。血液一般情况捣碎30秒即可；实体组织需要捣碎到溶液的颜色变浑浊（植物叶片的话，溶液的颜色将变成绿色）。如需更多研磨杵，可从我司另购。对棘手的样品，还可以增加95℃保温10～60分钟一步，待温度冷却到室温后再进入下一步。残留的实体组织碎片不会影响后续试验。
6. 加入100 μL免DNA提取PCR溶液B，震荡10秒混匀。
7. 常温12000×g离心2分钟。
8. 将上清液转移到一个干净的1.5 mL离心管中。如果不用，可以放-80℃长期保存。如果用于后续PCR，请直接进入下步。
9. 简短振荡混匀后取样品裂解产物原液用超纯水进行梯度稀释（1E1-1E5），分别取5 μL直接进行30 μL体系的PCR扩增，选能检测到的梯度作为模板。如果有N个样品则设置N+3个PCR管，其中N个用于待检测样品，1个用于水的阴性对照，一个用于免DNA提取PCR溶液A和B混合液的阴性对照，另一个用于阳性DNA样品的阳性对照。30 μL体系的PCR反应体系如下：
成份 | N 个 样品管 | 阴性对 照管 1 | 阴性对 照管 2 | 阳性 对照管 |
2×PCR MasterMix | 15μL | 15 μL | 15 μL | 15μL |
细胞裂解液(来于上步) | 5 μL | 不加 | 不加 | 不加 |
免 DNA 提取 PCR 溶液 A 和 B 混合液 | 不加 | 不加 | 5 μL | 不加 |
阳性 DNA 样品 | 不加 | 不加 | 不加 | 5 μL |
自备 PCR 引物 1 (10 μM) | 1 μL | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
自备 PCR 引物2(10 μM) | 1 μL | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
补自备超纯水到 | 30μL | 30 μL | 30 μL | 30μL |
注意：裂解液体积最好不要超过PCR体积的 1/10。如果需要增加模板的加入量，则PCR体系应该相应的增加。如果加入5 μL裂解液，则可以使用50 μL的PCR体系。
10. 放入PCR仪中进行PCR，PCR参数需要根据引物Tm值和靶分子长度等参数设置。一般不低于35次循环。
11. PCR 结束后取 5～10 μL 直接上样电泳（本产品不需要上样液），红色染料电泳速度相当于50 bp DNA片段。