产品介绍
液体样本RNA提取试剂TRezolLSReagent本试剂是一种完整的即用型试剂，针对从多种液体样本中分离高质量总RNA或同时分离RNA、DNA和蛋白进行了优化。该苯酚和异硫氰酸胍单相溶液通常可在一小时内从人、动物、植物、酵母菌、细菌和病毒来源的液体样本中分离RNA、DNA和蛋白的单独组分。本试剂可处理多种液体样本（样本量多达0.25mL）。相较于普通款trezol，本品可处理较大的样本。其配方可进行多次分离，可连续沉淀单份样本中的RNA、DNA和蛋白。样品在TRezolLS中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液会分成三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，RNA分布在上清层中。收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA提取的总RNA完整性好无蛋白和DNA污染，可用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、 翻译等。
特点
具有出色的裂解能力；一份样品同时提取RNA、DNA和蛋白质。
其配方适用于液体样本，如血清或病毒制剂。即使是难以处理的生物液体，依旧拥有出色的裂解能力。
维持RNA的完整性，从多种样本体积和来源获得可靠的纯化RNA。
产品稳定性高、易保存、保质期长。
性价比高、高效性、操作简单快捷。
注意事项
本试剂用于处理液体样本（例如血液和病毒样本），切勿将未稀释的本品与固体样品一起使用，处理固体样品会导致产率降低。
收集样本后立即进行RNA提取或收集后立即快速冷冻样本，并在-80°C或液氮中储存直至RNA提取。RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，NorthernBlot等。
若下游实验对DNA非常敏感，建议用RNasefreeDNaseI对RNA进行处理。
自备试剂：氯仿、异丙醇（新开封或提取RNA专用）、75%乙醇(用DEPC处理过的水配制)、RNasefree water 或者DEPC处理过的水。
使用独立包装的一次性无菌塑料器皿和不含RNA酶的一次性无菌移液器、移液器吸头和离心管。
如果起始材料含有高水平的RNase（RNA酶），如脾或胰腺样本，请在操作过程中注意保持低温，并先冷藏本试剂。
操作步骤
1.样本准备
收集样本后立即进行RNA提取或收集后立即快速冷冻样本，并在-80°C或液氮中储存直至RNA提取。每0.75mL TRezol LS 试剂使用的起始材料生物液体0.25mL，细胞数量7X107个细胞，如样本中含有高浓度污染物质（例如全血）的生物液体应用无RNA酶的水进行1:1稀释。本试剂与样品的体积比始终保持为3:1。为了便于从少量样本（<106个细胞或<10mg的组织）中分离RNA，或对于<0.25mL的样本体积，需使用不含RNA酶的水将样本体积调整为0.25mL。
2.裂解样本和分相
1) 向每0.25 mL 体积样品中加入0.75mLTRezolLS试剂。
2) 使用移液枪反复吹吸样品几次使样品匀浆化。注：匀浆后的样本可以在4°C下过夜保存或在-20°C下保存最长一年。
3) （可选）如果样本的脂肪含量较高，请在4°C至10°C下12000rpm离心5分钟，然后将透明的上清液转移至新管中。
4) 孵育5分钟以使核蛋白复合物完全解离。
5) 每 0.75 mL 用于裂解的TRezol LS试剂中添加0.2mL氯仿，盖紧试管盖子，然后通过摇动彻底混合。
6) 孵育2-3 分钟。
7) 在 4° C下12,000rpm 离心 15分钟。混合物分离成下层的红色苯酚-氯仿层、中间层和无色的上层水相。
8) 将含有RNA的水相转移至新离心管中。
9) 将新离心管倾斜45°，将移液头中的含有RNA的水相液体打出。注意！避免在吸取水相时吸到中间层和有机相。
（以下步骤可根据自身实验要求，直接选择相应实验操作，如只需提取RNA，只参照提取RNA步骤即可）
A. 提取RNA
(1)沉淀RNA
1) 每0.75 mL TRezol LS 试剂向水相中加入0.5 mL异丙醇。
2) 孵育10分钟。
3) 在4°C下12,000rpm离心10分钟。总RNA在试管底部形成白色凝胶状沉淀。
4) 使用移液器弃去上清液。
(2)洗涤RNA
1) 每0.75mLTRezol LS 试剂用1mL75%乙醇重悬沉淀。注：RNA保存在75%乙醇中，-20℃下可以保存至少1年，在4℃下可以保存至少1周。
2) 短暂涡旋样本，然后在4°C下7500rpm离心5分钟。
3) 使用移液器弃去上清液。
4) 将RNA沉淀真空干燥或室温晾干5～10分钟。注意！切勿用真空离心机干燥沉淀使RNA沉淀干燥，以确保RNA的完全溶解。部分溶解的RNA样本的A230/280比值<1.6。