DNA提取液(酚:氯仿:异戊醇25:24:1)/Tris 饱和 PCI 混合液

Tris 饱和 PCI 混合液（25:24:1 pH 8.0）

Tris-Saturated PCI Mixture (25:24:1 pH 8.0)

BFJ23059-250ml   

产品及特点：本产品是Tris PCI 的 25:24:1 的混合液，pH 偏碱性，用于 DNA 提取时去除蛋白质、多糖、脂类和酚类等杂质。本产品不能用于 RNA 提取。DNA 纯化时苯酚的作用是使裂解液中的蛋白质变性，同时抑制 DNase 对 DNA 的降解作用。用苯酚处理裂解液时，由于蛋白分子表面的很多极性基团与苯酚相似相溶，故蛋白分子溶于酚相，而 DNA 溶于水相，从而将 DNA 和蛋白质分开。由于苯酚与水有一定比例的互溶，所以如果使用非饱和酚，样品中的水分（含 DNA）会进入酚相，样品会丢失。同时水相中也会有少量的酚，这些残留的酚会抑制后续酶反应。而饱和酚就没有丢失样品的缺点，因为它已经提前充分吸足了水分（饱和酚中含 10%左右的水分），因此不会丢失样品。但由于仍然会有少数酚进入水相，抑制后续反应。氯仿的作用是让水和酚彻底分开，不互溶，彻底去除水相中的残留苯酚，从水溶液中沉淀得到的 DNA 就没有酚污染。异戊醇的作用是降低表面张力，从而减少操作过程（常常有震荡步骤）中气泡的产生，而这些气泡的表面张力可能会使 DNA 断裂。另外，异戊醇还有助于水相和酚相分相，使离心后的上层水相（含 DNA）、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定，便于移取上清，本产品仅能用于科研。

运输及保存：常温运输和保存，有效期 12 个月。

自备试剂：如果用于沉淀法回收 DNA，则需要无水乙醇或异丙醇、3 M 乙酸钠溶液 pH 5.2、 75%乙醇和超纯水。如果用于过柱法回收 DNA，则需要硅胶模离心吸附柱，上柱液，洗柱液和超纯水。

使用方法：该试剂为 DNA 提取过程中的常用试剂，使用方法参考分子克隆手册等参考书，或实验室 SOP。下列操作仅以 0.5 mL 样本供参考。

一、沉淀法：

1.将 0.5 mL 含 DNA 的细胞裂解液，或含有 DNA、RNA、蛋白质、脂类的混合液转移到 1.5 mL 塑料离心管中。

2.加入等体积的本产品，即 0.5 mL。

3.涡旋震荡 2 分钟。

4.常温 13000×g 离心 5 分钟，溶液将呈两层相。将含有 DNA 的无色水相转移到一个新的离心管中，剩下的有机相将呈蓝色。两相的相对位置跟样本比重有关，并不是任何时候无色水相都在上层。如果样本含盐浓度高，比重大，也可能在下层。

5.在上清中加入 0.1 倍体积的 3 M 乙酸钠溶液，pH 5.2 和两倍体积自备无水

乙醇（两倍体积乙醇可以用一倍体积异丙醇替代），颠倒 10 次充分混匀。

6.常温 13000×g 离心 15 分钟。

7.小心弃上清，不要触及管底离心面的沉淀。

8.加入 1 mL 75%乙醇，颠倒 10 次。

9.常温 13000×g 离心 3 分钟。

10.小心弃上清后短暂离心 30 秒，去掉残留的液体（约 50 μL）。

11.室温敞开盖子两分钟。

12.加入超纯水溶解DNA，然后进行浓度测定、电泳，PCR 等后续检测。

二、过柱法：

13.将 0.5 mL 含 DNA 的细胞裂解液，或含有 DNA、RNA、蛋白质、脂类的

混合液转移到 1.5 mL 塑料离心管中。

14.加入等体积的本产品，即 0.5 mL。

15.涡旋震荡 2 分钟。

16.常温 13000×g 离心 5 分钟，溶液将呈两层相。将含有 DNA 的无色水相转移到一个新的离心管中，剩下的有机相将呈蓝色。两相的相对位置跟样本比重有关，并不是任何时候无色水相都在上层。如果样本含盐浓度高，比重大，也可能在下层。

17.在上清中加入 1-2 倍体积自备上柱液，所用体积跟所用上柱液的配方相关。

18.颠倒混匀，取 0.7 mL 混合液上柱。

19.常温 13000×g 离心半分钟，弃穿透液。

20.再取 0.7 mL 样本-上柱液混合液上同一个柱子。

21.常温 13000×g 离心半分钟，弃穿透液。

22.重复第 20-第 21 步，直到混合液全部上柱。

23.加入 0.7 mL 洗柱液。

24.常温 13000×g 离心半分钟，弃穿透液。

25.重复第 23-第 24 步一次。

26.不加任何溶液，将吸附柱离心半分钟。

27.在吸附柱中加入 30-50 μL 的超纯水，室温放置 2 分钟后，将吸附柱放入一个新的 1.5 mL 离心管中，13000×g 离心半分钟，收集的穿透液就是纯化的 DNA 溶液。

28.对所得的 DNA 溶液进行浓度测定、电泳，PCR 等后续检测。