辣椒轻斑驳病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

辣椒轻斑驳病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品及特点

本试剂盒可用于检测辣椒轻斑驳病毒。辣椒轻斑驳病毒属于帚状病毒科(Virgaviridae)

烟草花叶病毒属(Tobamovirus)的无包膜正单链 RNA 病毒。在电镜下，辣椒轻斑驳病毒呈

现为直杆状，长度约为 310±10 纳米，直径约为 18 纳米。自然条件下，辣椒轻斑驳病毒

主要侵染辣椒，未见其自然侵染其他植物的报道;人工接种可侵染茄科部分寄主，不能侵

染番茄。本产品是根据探针法荧光定量 RT-PCR 原理开发的辣椒轻斑驳病毒检测试剂盒，

它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 RNA 模板。

2. 引物等组分经过优化，灵敏度高。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物是根据辣椒轻斑驳病毒 RNA 序列高度保守区设计，不会跟其他

病毒的 RNA 发生交叉反应。

5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5 个数

量级。

6. 本产品足够 25 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。

7. 本产品只能用于科研。

产品组成 编号 规格

2 × OneStep Probe Mix   275 μL

OneStep Probe Enzyme Mix   25 μL

DEPC-H2O   500 μL

荧光模板稀释液   500 μL

辣椒轻斑驳病毒 RT-qPCR 引物-探针混合液   110 μL

辣椒轻斑驳病毒 RT-qPCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL)   25 μL

使用方法

一、RNA 提取(样本制备区)

用自选方法提取纯化样品 RNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。建议使用病毒基因组 DNA/RNA 提取试剂盒提取 RNA。

二、稀释标准曲线样品(样本制备区)

（由于阳性对照浓度高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，避免污染样

品或本试剂盒的其他成分）。

1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光模板稀释液，（最好用带芯枪头，下同）。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，

得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡

1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡

1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

若无需制作标准曲线，将阳性对照稀释到 1×10E5 拷贝/μL 即可。

结果分析

1. 如果制作标准曲线，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标

准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA 浓度的 log 值，推算出其浓

度。

2. 如果未制作标准曲线，按照如下标准判定结果：

阳性对照（1×10E5 拷贝/μL）结果：Ct 值<30，有明显指数增长，呈典型的 S 型曲线。

阴性对照结果：Ct 值>40 或无 Ct 值，无明显指数增长期和平台期。

样本检测结果：Ct 值<38，有明显指数增长，表明样本中检测出辣椒轻斑驳病毒，结

果为阳性；Ct 值>40 或无 Ct 值，表明样本中未检测出辣椒轻斑驳病毒，结果为阴性；Ct

值在 38-40 范围，应对样本进行复检，如重复实验结果 Ct 值仍在 38-40 范围，有明显指

数增长，则判定为阳性，否则为阴性。