高效内毒素去除剂（20次）

高效内毒素去除剂（20次）

产品组成

试剂A 1.5ml

试剂B 1.5ml

说明书   1份

注：3次抽提为一次

客户自备:

无内毒素水（注射转染使用无内毒素水，普通转染超纯水即可）

70%无水乙醇（使用无内毒素水，分析纯及以上无水乙醇）

TE（Tris-HCl 10mM，EDTA 1mM，PH8.0，无内毒素水配置）或无内毒素水

储存条件:

本试剂盒在室温（15-25℃）干燥条件下，可保存1年；更长时间的保存可置于2-8℃。

产品简介：

细菌内毒素(脂多糖，LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。人们在研究革兰氏阴性菌血症和内毒素血症的过程中，发现细菌内毒素在其中起着关键的作用。质粒转染或注射到动物体内，内毒素的含量直接决定转入的机体能否存活。本试剂盒采用独特的配方，单次抽提可去除质粒样本90%以上的内毒素含量，质粒样品最终的内毒素水平可低于1 EU/ug。

操作步骤：（常温1.5ml离心机上操作，不可低温。）

注意：需要自备无内毒素TE8.0或ddH2O；70%乙醇。

1．将450ul粗提质粒放入1.5ml离心管中，并加入0.1倍的内毒素试剂A混匀；

注意：质粒样本浓度建议200ng/ul以上，但不宜超过2ug/ul；

2．a、在离心管中加入15ul 内毒素试剂B，震荡混匀5-10s至溶液为混浊均匀的液

     b、冰浴3min，期间颠倒混匀一次，液体应该由浑浊变为澄清；

     c、50℃水浴3min，期间颠倒混匀一次，液体应该由澄清变为浑浊；

d、12,000 rpm (~13,400×g )离心2min，将上层水相转移到新的1.5ml离心管中，弃去下层水相及离心管；极少量的下相污染，不影响提取回收。

注意：内毒素试剂B 粘稠，吸取时应缓慢吸液，通常吸打两次可有效避免气泡吸入。如担心取样问题，可用万分之一天平校准，15ul相当于15mg。试剂B可以在宽的范围（±5ul）不影响实验结果，推荐±2ul。

3．重复步骤2 两次；

注意：经一次步骤2后，内毒素不大于500EU/ug，对绝大多数普通转染实验都可不做步骤3；重复两步骤2次后，内毒素量可以达到10EU/ug数量级，经检测可以满足绝大多数注射转染实验。

4．在离心管中加入2-3倍体积无水乙醇，混匀后通常此时应该出现明显的丝状DNA沉淀；12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1min，弃上清；

5．加入500-700ul 70%乙醇（自备），震荡5-10s，沉淀重悬，不贴壁即可，6,000-7000 rpm(~4000×g ) 离心1min，弃上清；

6．重复步骤5一次。

7．对于残留的漂洗液，可以8,000 rpm (~6000×g ) 离心10s，用10ul吸头从沉淀另一侧吸干净去除，超净台通风5min 晾干沉淀。

8．加入30-100ul TE或水（自备），静置溶解，晾得过干，可能会比较难溶解。

注意：如果用于注射，推荐无内毒素水溶解，这样效果更好