1、 用途：免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的桔青霉素，从而对样品起到非常针对性的净化作用，过柱净化后的样品液可直接用于 HPLC 分析。亲和柱与 HPLC 配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。本亲和柱可用于样品中桔青霉素的样品提取、净化。
2、 概述：桔青霉素是由真菌（红曲霉）产生的有毒的次级代谢产物，其主要作用的靶器官是肾脏，也称为肾毒素，同时，桔青霉素还有致畸性。主要污染红曲类产品、玉米、大米、奶酪等，对人和动物的健康危害较大。3、 原理：测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的桔青霉素经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过桔青霉素免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用洗脱液洗脱桔青霉素，然后注入到分析仪器中用于检测。
4、 包装组成：每一个盒中包括各种规格桔青霉素免疫亲和柱及 1 份说明书。
5、 需要的材料但盒中不提供：
5.1 设备----HPLC----气控操作架（含空气泵）----高速均质器（最高转速≥10,000r/min）或摇床----离心机（可达到 6000r/min）或漏斗----天平----粉碎机----分样筛：1mm 孔径----量筒：100mL/1L----注射器：10 mL/20mL----移液器或移液管：1mL----均值杯（或 250mL 具塞锥型瓶）----快速定性滤纸----离心管：50mL----微纤维滤纸（Whatman 934-AH）
5.2 试剂----甲醇（CH3OH）：分析纯、色谱纯----氢氧化钠（NaOH）：分析纯----磷酸（H3PO4）：色谱纯----氯化钠（NaCl）：分析纯----氯化钾（KCl）：分析纯----十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）或磷酸氢二钠（Na2HPO4）：分析纯----吐温-20（C58H114O26）：分析纯----水（H2O）：蒸馏水或去离子水----盐酸（HCl）：分析纯
6、 注意事项：
----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22～25℃）。
----亲和柱 2～8℃储存，不得冻存。
----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
----取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变。
----柱容量：500ng，当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当降低上样液的体积，重新检测。
----pH：亲和柱的上样溶液 pH 需在 6～8 之间，若偏离此范围需要用盐酸或氢氧化钠调节 pH。
----上机检测时的溶剂与流动相保持一致可以消除溶剂效应的影响。
----桔青霉素可致畸，应戴手套口罩等防护工具操作。
----使用过的容器及桔青霉素溶液最好用次氯酸钠溶液（5%V/V）浸泡过夜。
7、 配液：
7.1 提取液（70%甲醇-水溶液）：量取 700mL 甲醇，加入 300mL 纯水，混匀。
7.2 2mol/L 的氢氧化钠溶液：称取 80g 固体氢氧化钠，溶于 1000mL 水中。
7.3 磷酸溶液（10mmol/L, pH7. 5）：准确移取 1.376mL 磷酸加水定容至 2000mL ,用 2mol/ L的氢氧化钠溶液调节 pH 至 7.5。
7.4 0.01M PBST 溶液：称取 8.00g 氯化钠、1.20g 磷酸氢二钠（或 2.92g 十二水合磷酸氢二钠）、0.20g 磷酸二氢钾、0.20g 氯化钾，用 900mL水溶解后，用盐酸调节 pH 至 7.4±0.1，加入 1mL 吐温-20，再加水至 1000mL。
8、 样品处理：
8.1 粮食类样品
----10g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过 1mm 分样筛）加入 50mL 提取液（7.1）混匀；-
---高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡 20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液；
----取上清液（或滤液）5mL，加入 35mL 磷酸溶液（7.3）或0.01M PBST 溶液（7.4）混匀（如遇基质较复杂的样本，建议用 0.01M PBST 稀释），再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；
----取 20mL 上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数：2
8.2 红曲及其制品
----1g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过 1mm 分样筛）加入20mL 提取液（7.1）混匀；
----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡 20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液；-
---取上清液（或滤液）1mL，加入 39mL 稀释液（7.4）混匀，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；
----取 10mL 上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数：80
注：对于桔青霉素含量高的样本，可以适当提高提取比例，此时稀释倍数需相应改变。
9、 操作程序：
----取出免疫亲和柱，将注射器筒的下端直接穿透亲和柱上方的塞子，完成注射器筒与亲和柱的连接，将其放置在气控操作架上进行固定；
----取适量步骤 8 中处理后的溶液，注入到注射器筒中；
----去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以 1～2 滴/秒的速度流出；
----待液体排干后，净化样品为粮食类时，加入 5mL 磷酸溶液（7.3）洗涤，流速 1～2 滴/秒；如遇色素吸附颜色较深或存在基质较复杂的样本，建议用 0.01M PBST 溶液（7.4）洗涤 10mL，流速 1～2 滴/秒；
----净化样品为红曲及其制品时，加入 10mL 0.01M PBST 溶液（7.4）洗涤，流速 1～2 滴/秒；
----待液体排干后，压入空气吹干柱子中的水分，加入 2mL 甲醇洗脱亲和柱，流速 1 滴/秒，收集全部洗脱液；
----洗脱液用 0.22μm 微孔滤器过滤后转移至样品瓶用于 HPLC分析。
* 每次上样前都要将上次液体完全排干。
10、 判读结果：桔青霉素的含量=检测浓度×稀释倍数×2
11、 贮藏条件及有效期：贮藏条件：2～8℃。有效期：该产品有效期为 18 个月。