细胞缺氧检测试剂盒RU(dpp)3cl2-红色荧光

细胞缺氧检测试剂盒RU(dpp)3cl2-红色荧光

规格：200T

组成：Ru(dpp)3Cl2 红色缺氧探针500 μL

产品简介：缺氧是恶性肿瘤发生、发展过程中普遍存在的现象,其产生主要与肿瘤无限制生长、氧耗增加、血供不足及肿瘤组织血管发育不良等有关,

也是临床多种疾病共有的病理过程。缺氧环境下的肿瘤细胞易发生转移,并且能增加对放疗、化疗的抗拒性,从而降低了治疗效果。因此,研究缺氧的

发生和发展规律,对临床治疗、增强机体代偿适应能力都有重要意义。

细胞缺氧通常可导致胞内的硝基还原酶(Nitroreductase,NTR)的增加。在缺氧条件下，以还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Reduced nic-otinamide

adenine dinucleotide,NADH)作为电子供体，细胞内的硝基还原酶可催化多种外源硝基芳香族化合物发生单电子转移，生成硝基阴离子自由基，

随后进一步被还原成羟胺或氨基。

细胞缺氧通常通过 HIF 蛋白表达、基因表达、细胞活性等方法检测，但是这些方法比较麻烦，对实验操作的熟练程度要求，我司RU(DPP)3 细胞缺氧

检测试剂盒通过细胞缺氧后的氧化应激反应检测细胞的缺氧损伤，能够简单快捷的反映的细胞缺氧损伤的情况。

RU(DPP)3Cl2 荧光探针经过特殊共轭配合物处理，可自由透过活细胞膜进入细胞内，红色荧光随着缺氧程度的增加而增强。因此，根据活细胞中红色荧

光的产生，可以判断细胞缺氧的变化。用酶标仪、流式细胞仪或荧光显微镜可直接检测观察，是一种快速简便的细胞中缺氧变化的检测方法。RU(DPP)3

在激发波长 455 nm，发射波长 613 nm 附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光，从而测定细胞内缺氧状况。

本试剂盒可以用于各种真核培养细胞、培养组织及组织冰冻切片的检测。

产品特点：

使用方便：可用荧光酶标仪、荧光分光光度计或流式细胞仪检测；

背景低，灵敏度高；

线性范围宽，使用方便。

检测方法：

荧光酶标仪

荧光光度计

荧光显微镜

流式细胞仪

激光共聚焦

样本类型：

悬浮细胞

贴壁细胞

【注】：

探针长期不用可以-20℃保存。

探针需密封保存。减少开盖次数。

避免反复冻融。可以根据需要分装后冻存。

探针液 A 为 DMSO 溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

可以用手捂住使其融解或 37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

试剂拆封后请尽快使用完！

有效期：6 个月。

【注】：有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。

             试剂拆封后请尽快使用完！

【使用方法】

使用注意事项：

l 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

l 荧光探针在   2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

l 荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

l 探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。

l 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

l RU(DPP)3 在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。

l 对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察缺氧的变化。

RU(DPP)3 探针标记：

原位标记：仅适用于贴壁培养细胞。

1. 按照1:25-500 用含血清培养基稀释 RU(DPP)3 探针。

【注】:

l RU(DPP)3 溶液可25-500 倍稀释，以此染色液更换细胞培养液；也可直接向细胞孵育液体中加入 RU(DPP)3 探针溶液至所需浓度。

l 根据细胞缺氧程度的不同， RU(DPP)3 终浓度可选择在25-500 倍稀释的范围，100 倍稀释适合大多数细胞样本。孵育时间可选择15-60 分钟，在37℃进行避光孵育。

2. 去除细胞培养基，用PBS 洗细胞一次。

3. 加入适当体积稀释好的 RU(DPP)3 探针。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于96 孔板每孔加入200ul 染色液，六孔板的一个孔加入稀释好的 RU(DPP)3 探针不少于1 毫升。

4. 在37℃细胞培养箱内避光孵育15-60 分钟。

5. 用无血清细胞培养基洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的 RU(DPP)3 探针。

【注】:

l 也可以用HBSS/PBS 洗涤细胞。

6. 用PBS 重悬细胞。

7. 检测细胞荧光。

【注】:

l 缺氧损伤程度高，荧光强度高。

l 使用455 nm 激发波长，613 nm 发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。

收集后标记：悬浮细胞或贴壁细胞消化处理

1. 按照1:25-500 倍用含血清培养基稀释RU(DPP)3 探针。

【注】:

l RU(DPP)3 溶液可25-500 倍稀释，以此染色液更换细胞培养液；也可直接向细胞孵育液体中加入 RU(DPP)3 探针溶液至所需浓度。

l 根据细胞缺氧程度的不同，RU(DPP)3 终浓度可选择在25-500 倍稀释的范围，100 倍稀释适合大多数细胞样本。孵育时间可选择15-60 分钟，在37℃进行避光孵育。

2. 离心移除培养基，用PBS 洗细胞一次。

3. 细胞收集后悬浮于稀释好的RU(DPP)3 探针中，细胞浓度为1*10⁶-2*10⁷/毫升，37℃细胞培养箱内避光孵育15-60 分钟。每隔3-5 分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。

4. 用无血清细胞培养基洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的 RU(DPP)3 探针。

【注】:

l 也可以用HBSS/PBS 洗涤细胞。

5. 用PBS 重悬细胞。

6. 检测细胞荧光。

【注】:

l 缺氧损伤程度高，荧光强度高。

l 使用455 nm 激发波长，613 nm 发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。

共聚焦/荧光显微镜/酶标仪检测：

1. 对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取

25-50μl 细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。

2. 荧光显微镜下，用蓝光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像，缺氧损伤细胞被染成红色。

流式细胞仪分析：

对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5~1 ml 冰冷PBS 重悬细胞（5~10 万）。

采用455 nm 波长激发，测定613 nm 的发射。

阴性细胞仅有较低的荧光强度，缺氧细胞有较强的红色荧光。

不同波长绿色荧光产品参考：

细胞缺氧检测试剂盒（绿色O91）