RIPA裂解液

描述： RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典和最常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPA 裂解缓冲液制备用于Western特别是用于免疫共沉淀的裂解产物已经是一种首选的标准操作，也适用于大部分抗原表位检测，特别是免疫共沉淀等实验。

成分：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.

储存：4 ℃保存 12个月有效

使用说明：

制备细胞裂解产物：

1. 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20ul, 107 cells =~100ul PCV）；

2. 每50～100ul PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液（250~500ul）,冰浴放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；

3. 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。

注意：如所得蛋白产物较为粘稠，可先95℃加热5分钟，迅速冰浴5分钟，再进行步骤3

制备组织裂解产物：

1. 取50-100mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；

2. 加入 0.5-1ml 预冷 RIPA 裂解缓冲液；

3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；

4. 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物。

注意：如所得蛋白产物较为粘稠，可先95℃加热5分钟，迅速冰浴5分钟，再进行步骤4

说明：

1. 转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；

2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白提取，避免某些不稳定蛋白的降解；

3. RIPA裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂，用户可自行选择添加。