质粒小量抽提试剂盒(Plasmid Mini Preparation Kit, Plasmid Miniprep Kit)是一种用于从大肠杆菌中进行小量质粒快速抽提的离心柱式试剂盒。
本试剂盒适用于常用的EndA-菌株DH5α、JM109和XL-1 blue等。对于EndA+菌株如JM110、BL21(DE3)、TG1和HB101等,可以顺利完成质粒抽提,但从EndA+菌株中抽提获得的质粒会有轻微的核酸酶污染,如果在内切酶缓冲液中37℃孵育1小时会导致质粒全部降解。
野生型大肠杆菌中表达Endonuclease I,能切割并降解双链DNA。编码Endonuclease I的基因是endA,如果endA突变失活,其基因型会被标注为endA1,相应的突变菌株被称为EndA-菌株,而野生型菌株则被称为EndA+菌株。常见的EndA-和EndA+菌株参见附表1。从EndA+菌株中抽提的质粒,微量核酸酶和质粒结合而容易被共纯化,导致容易降解。
本试剂盒采用了一种新型的离子交换柱。在特定条件下,使质粒能在离心过柱的瞬间,结合到质粒纯化柱上,在一定条件下又能将质粒充分洗脱,从而实现质粒的快速纯化。无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,12个样品只需不足30分钟即可完成。
每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限约为20微克。每个纯化柱可用于抽提1-5毫升用LB培养过夜的大肠杆菌。抽提所得质粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。抽提获得的质粒DNA的OD260和OD280比值也会因菌种不同等原因而略有波动。
本试剂盒抽提所得到的质粒可直接用于转染细胞,DNA测序,PCR,基于PCR的突变,体外转录,转化细菌,内切酶消化等。