适用样本
乳汁/唾液
产品特点
1.使用方便,无需超速离心,省时省力;
2.纯度高,富集量大,应用范围广;
3.获取的Exosome结构和功能完整;
4.稳定性好,便于运输,便于保存。
仪器准备
1.离心机
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液 HBSS 纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用方法
1. 收集2ml待提取的乳汁/唾液样品,置2-8℃保存。
2. 将样品在4℃条件下,3000×g离心15分钟。弃沉淀,收集上清。
3. 小心将上清移入另一干净离心管中。
4. 将样品在4℃条件下,10000×g离心20分钟。弃沉淀,收集上清。
5. 小心将上清移入另一干净离心管中。
6. 在2ml乳汁/唾液样品中加入2ml提取液A,盖紧离心管盖,上下颠倒混匀1分钟左右,使液体充分混匀。
7. 在4ml液体样品中加入1ml提取液B,盖紧离心管盖,上下颠倒混匀1分钟左右,使液体充分混匀。
8. 置2-8℃冰箱静置过夜。
9. 在4℃条件下,10000×g离心60分钟。
10. 小心移除上清,收集沉淀。
11. 取50-100ul外泌体保存液将沉淀重悬,即得到外泌体样品。
12. 将外泌体样本-80℃保存或直接用于下游应用。
使用注意事项
1.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂。
2.以下以2ml乳汁/唾液为例,实际操作时按乳汁/唾液样本和提取液用量体积比等比例调整使用即可。
3.不同乳汁/唾液样本外泌体数量差异极大,请根据实际情况选择乳汁/唾液样本的量,根据下游应用和参考文献确定。条件允许的情况下采用尽可能多的乳汁/唾液样本。
4.常规的乳汁/唾液样本最佳上样量为5-10ml及以上,条件允许的情况下采用尽可能多的乳汁/唾液样本。
5.已经分离好的外泌体样本如果需要进行电镜观察,只能冰上或4℃保存,存放时间不超过两天,注意不可冷冻保存,否则可能会影响电镜观察效果。